PCRda (polimeraza zanjir reaktsiyasi) eksperimentlar, qadoqlash oddiy ko'rinishi mumkin, ammo u butunlay regent barqarorligiga, foydalanish qulayligi va ishonchli natijalarga olib keladi. - loratli laboratoriya yoki tijorat predmetlari, PCRning qadoqlash texnikasini o'zlashtirishda umumiy xatolardan qochishi va eksperimental samaradorlikni oshirishi mumkin. Quyida biz moddiy tanlov, qadoqlash strategiyalari va saqlash ma'lumotlari bo'yicha amaliy maslahatlarni almashamiz.
I. Qadoqlash materiallarini tanlash: muvofiqlikni va himoyachini ustuvorlik
PCR reaktsiyalari haroratga, engil va ifloslantiruvchi moddalarga sezgir, shuning uchun qadoqlash materiallari uchta asosiy talablarga javob berishi kerak: Huzuriy marosim, yorug'lik - yorug'lik va kimyoviy inertizatsiya.
Kentrifigurun krujkalar va PCR plitalari uchun polipropilen (pp) uchun eng yuqori xolistiriladi . 0.2} - - - - -} tezkor issiqlik transporti uchun juda yaxshi, 0,5 ml naychalar konsentrlangan reagentlarni saqlash uchun yaxshiroqdir. 96 - PCR plitalari uchun biz skovoridlangan dizaynni tanlashni tavsiya qilamiz
Muhrim usuli: An'anaviy san'ul sanbul naychalar tekis yoki ko'tarilgan qopqoqlardan foydalanadi (bug'lanishni oldini olish va qurish uchun). Biroq, uzoq vaqt - ashyoni saqlash uchun, isitma - muhrlash plyonkasi (masalan, parafilm kabi) yoki nafas oladigan plyonka (masalan, aerazeal) ichki va tashqi bosimni muvozanatlash tavsiya etiladi. PCR plitalari (yuqori {- haroratga chidamli bo'lsa)
Yengil himoya qilish: chiroqni o'z ichiga olgan reagentlar - Ta'sirchan ingredientlar (masalan, ayrim bo'yoqlar yoki premerlar) alyuminiy folga yoki qora metro plitalaridan foydalanish kerak (ba'zi ishlab chiqaruvchilar tomonidan mavjud) ishlatilishi kerak.
II. Alivotexnika usullari: Takroriy muzlatgichni minimallashtirish - tsikl
Alip-sulogramma reagentlar PCRning qadoqlash va to'g'ridan-to'g'ri eksperimental repetitkorlikka ta'sir qiladi.
Master Mix Alicoting: Tijorat ustasi aralashmasi (masalan, TAQ Ferzu va DNTP aralashmasi) 10% {}}} {}} {}} {20 mkt reaktsiya uchun 10% reaktsiya, alip 22 mkl uchun 22 mkl uchun 22 mkl). To'satdan muzlatgichdan foydalanib bo'lmang.
Ilmiy va shablonlar: Ilmiy birja eritmalaridan ajratilgan va 20 darajadagi - da saqlash tavsiya etiladi. Ishlatishdan oldin ishlaydigan kontsentratsiya (odatda 0,1-1 mkm) ga suyaning. Genom DNK kabi shablonlar bir martalik - dan ajratilgan bo'lishi kerak - o'zaro zaharlanishdan saqlaning.
Kontaminatsiyaning oldini olish bo'yicha maslahatlar: Alikatni olishdan oldin sanoqli naychalar quruqligini ta'minlash (qoldiq pcribit pcribite phcriginit Pricaltite} Sovuq reaktivlarini oldini olish uchun, terining DNKning ifloslanishini oldini olish uchun butun jarayon davomida butun jarayon davomida qo'lqop kiying.
III. Yorliq berish va yozib olish: "qora qutisi" tuzog'idan qoching
Belgilangan yorliqlar PCRning qadoqlash uchun juda muhimdir; Noto'g'ri yorliq butun tajribani buzishi mumkin.
Majburiy yorliqlash Ma'lumot: Raunent Nom (masalan, 2 × Tor mastermix), kontsentratsiya / 1 dntps "(, masalan," -20 dntps "(masalan," -20 daraja "(masalan," -20 darajasi "(masalan," 6 oy ichida foydalanish ").
Maxsus yorliq
Yozish Sinxronlash: Har bir naychaning tarkibi (masalan, primer ketma-ketligi, TM qiymatidagi) va ularni jismoniy yorliq raqami bilan bog'lash uchun elektron jadvalni (masalan, Labguru) foydalanish tavsiya etiladi.
IV. Saqlash va tashish: harorat va jismoniy himoya qilish
PCR reaktivlarining barqarorligi saqlash sharoitlariga juda bog'liq va transport paytida qo'shimcha himoya talab etiladi.
Umumiy saqlash:
Fermentlar (Tavq, teskari tintuv o'tkaziladigan tranddoz): uzoq - - - attori saqlash (muzlatilgan muzlikli tsikllardan saqlansin; alipotot va kelajakda foydalanish uchun -80 darajadan saqlaning);
Asrentlar / problar: 1 yil davomida -20 darajali dog '(agar biotin kabi o'zgartirilgan guruh bo'lsa, yorug'likdan saqlang);
- - enzime tamponlari (masalan, PBS): qisqa - 4 darajasida (1 oygacha).
Transport talablari:
Sovuq zanjirli transport uchun fermentlar uchun ({-}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}} va qisqa muddatli tashish uchun ko'k muz (taxminan 0 daraja).
Haddan tashqari tebranishdan saqlaning (PCR plitalari ko'pik qutilarida, quduqlar orasidagi reaktivlarni aralashtirish uchun).
Yozgi haroratda, qadoqlarga izolyatsiyalash qatlamini qo'shing (masalan, alyuminiy folga izolyatsiya sumkasi + muzlatilgan jel paket).
V. Umumiy muammolar va echimlar
1-muammo: past haroratlarda past haroratda) → Yechim: 1000 RPM, 1 minut, 1 daqiqada) Alicotedan oldin qisqa (1000 RPM, 1 daqiqada). Yaxshilab aralashtirishdan oldin 37 daraja inkubatorda eritib oling.
2-muammo: plastinka muhrlashi osongina pechlar → echim: Issiqlik - issiqlik muhrlangan yoki issiqlik pimlidan foydalanishni tanlang ({{{{-} hisobidan foydalaning.
3-muammo: Blurlangan yorliqlar → Yechim: suv o'tkazmaydigan markerni (masalan, sitee) yoki lazerni spirtli ichimliklarni alkogolda yo'q qilishining oldini olish uchun bosib chiqarish lozimlari.
Xulosa
PCR paketlari shunchaki "qadoqlash" reagentlaridan ko'proq narsa; Bu eksperimental ishonchlilik uchun birinchi mudofaaning birinchi yo'nalishi. Tegishli materiallarni tanlash, batafsil yorliqni saqlash va tashish paytida qat'iy haroratni nazorat qilish, siz insonning xatosini kuchaytirish, yanada barqaror kuchaygan reaktsiyalar va yanada ishonchli natijalarni kuchaytirishi mumkin. Esingizda bo'lsin: tafsilotlar muvaffaqiyatni aniqlaydi. To'g'ri PCRning qadoqlash amaliyoti butun tajribangiz davomida jiddiy vaqtni bartaraf etishi mumkin!